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染色液使用時需要注意哪些要點？
更新時間：2022-10-20 點擊次數(shù)：1657次
染色液是一種間接的不含生物素的系統(tǒng)，用于檢測鼠抗IgG、IgM和兔源性一抗。對常規(guī)經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋的組織和冰凍組織切片中的靶抗原進行檢測。
染色液的使用方法：
1.DAB顯色液配制
10mMTris-HCl(pH7.6)9mL+DAB(diaminobezidin3，3-二氨基聯(lián)苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2或CoCl21mL,顯色時加入5-10mL30%H2O2混勻后立即使用。
2.顯色
準(zhǔn)備好含有待測蛋白的固相膜：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
3.加入適量的DAB顯色液，鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。
4.置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育2至5分鐘，避免光照(暗室操作)，直至棕褐色沉淀出現(xiàn)。
5.用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗。
6.空氣中晾干。
7.拍照記錄。
染色液的使用注意事項：
1.DAB有潛在致突變作用，操作時應(yīng)注意穿戴好防護用具。
2.DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出，應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用；
3.顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用；
4.DAB在常溫下不穩(wěn)定，每次取用后均應(yīng)及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環(huán)境污染。
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